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MATRIZ EXTRACELULAR  DESCELULARIZADA CEREBRAL: ANDAMIO PARA CULTIVO CELULAR E

INGENIERÍA DE TEJIDOS (PARTE 1)

 

Carly Morgan 1,2, Sebastián Valerio 2,3, Didio Ortiz 2, Juan Camilo Rojas 2, Diego Reginensi 2, Rolando Gittens 2

 

1. University of Washington, WA, USA; 2. Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología, Panamá; 3. Acharya Nagarjuna University, India

 

El desarrollo económico de Panamá en los últimos años ha contribuido a mejorar la calidad y esperanza de vida en un gran porcentaje de la población, pero al mismo tiempo la incidencia de enfermedades crónicas es cada vez más frecuente. La isquemia cerebral es una de las principales causas de muerte y discapacidad a nivel mundial y es la cuarta causa de muerte en Panamá, donde el 50% de todas las muertes en todo el país se debe enfermedades no transmisibles como un accidente cerebrovascular. En la actualidad, las únicas terapias clínicas para el accidente cerebrovascular son la hipotermia y la trombólisis (tPA), que puede ayudar a detener la progresión de la lesión, pero no lo hacen revertir el daño ya sufrido. Por lo tanto, la necesidad de nuevas terapias neuroprotectoras y

neurorregenerativas sigue siendo una alta prioridad. La matriz extracelular descelularizada (MECd) se ha convertido en una nueva aproximación en la promoción de las propiedades regenerativas innatas tisulares al actuar como un andamio biológico que proporciona soporte estructural adecuado para el tejido de interés, al mismo tiempo es capaz de presentar ligandos específicos tisulares que promueven el anclaje celular, la señalización intracelular y la diferenciación. Las MECd tiene varias ventajas sobre los biomateriales sintéticos y/o biomoléculas activas individualizadas, las cuales no conservan la complejidad y sinergia del tejido nativo. Actualmente, son pocos los estudios que han evaluado las propiedades de la matriz extracelular descelularizada del cerebro (MECd) y su efecto sobre la respuesta celular.

En este estudio establecimos un protocolo de descelularización de 5 días basado en agitaciones mecánicas y la utilización de detergentes específicos (p.e SDS). Presentamos la caracterización estructural y bioquímica de la matriz extracelular descelularizada de diferentes subregiones del cerebro de porcino. Mediante espectrometría de masas estudiamos la identificación de diversas proteínas en diversas subregiones cerebrales (corteza, cerebro medio, cerebelo) La caracterización de la matriz extracelular descelularizada cerebral la realizamos mediante análisis molecular de ADN (Quant-ITTM PicoGreen®, Invitrogen) y observamos un nivel de descelularización del tejido

cerebral del 92%. La conservación de la ultraestructura de nuestro biomaterial ha sido analizada mediante análisis proteico (BCA Assay, PierceTM) y microscopia electrónica de barrido (SEM). Estos resultados preliminares, buscan a futuro la confección de un protocolo de descelularización de menor tiempo de desarrollo para la realización de estudios in vitro.

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